泗陽云禾源無塵室泗陽云禾源無塵室制程制程規(guī)范規(guī)范

　目

　錄

　一、

　組織培養(yǎng)· ·································· ··· ·· ····· ·

　2 2

　二、

　增殖培養(yǎng)· ···································· ·· ····· ·

　3 3

　三、

　· 各級培養(yǎng)基制作····························· ·· ···· ·

　4 4

　四、

　· 人職員作責(zé)任分配表··························· ·· ···· · ·

　6 6

　五、

　· 無塵室工作人員調(diào)休措施························· ·· ·· ·

　9 9

　六、

　· 無塵室工作人員獎逞措施·························· ··· ·· · 10

　七、

　薪資說明· ·························· ··············· 10

　八、

　· 補(bǔ)充說明········································ 11

　制程和規(guī)范

　一、

　組織培養(yǎng)：

　1. 查高產(chǎn)能栽培庫菌譜表，分析得以確定無任何遺傳性病史，采集5 棵金針菇； 2. 金針菇菇傘均勻圓厚、菇桿挺直、菇身纖維直密、菇腳不干縮； 3. 使用 10#解剖刀將菇帽頂表面切除，使用刀尖取出菇桿和傘肉之間子實(shí)體，移入 PDA 培養(yǎng)皿中做菌絲轉(zhuǎn)換培養(yǎng)； 4. 每瓶金針菇組織分離2個細(xì)胞培養(yǎng)皿，采集5組共10個組織培養(yǎng)； 5. 放置恒溫培養(yǎng)箱中，溫控 20℃濕度自然； 6. 培養(yǎng) 12 天后進(jìn)入各項(xiàng)檢測：液態(tài)搖瓶培養(yǎng)（純度分析），目視強(qiáng)度比較，結(jié)抗現(xiàn)象交叉比對，顯微鏡檢； 7. 5 天后精選出 2 組織培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)皿，分別編號為 A 組及 B 組； 8. 將 AB 兩組液態(tài)培養(yǎng)液，增殖于木屑三角瓶中進(jìn)行著床試驗(yàn)； 9. 20 天后菌絲熟成在接入栽培瓶培養(yǎng)基中進(jìn)入出菇試驗(yàn)； 10.26 天后成菇采收時將 AB 兩組作產(chǎn)質(zhì)比對，選出優(yōu)異表現(xiàn)組別再進(jìn)行另一次組織培養(yǎng)； 11.整個步驟耗時約 65～70 天；

　菌種名━ 組別

　母 代日期━代數(shù)

　移轉(zhuǎn)日期━代數(shù)

　菌種名━組別

　母 代日期━代數(shù)

　移轉(zhuǎn)日期━級數(shù)

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0811 ━2 2

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0811 ━2 2

　菌種名━組別

　母 代日期━代數(shù)

　移轉(zhuǎn)日期━級數(shù)

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0827 ━3 3

　菌種名━組別

　母 代日期━代數(shù)

　移轉(zhuǎn)日期━級數(shù)

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0921 ━4 4

　菌種名━組別

　母 代日期━代數(shù)

　移轉(zhuǎn)日期━級數(shù)

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　1016 ━5 5

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　0811 ━2 2

　T022 ━B B

　0 0 802 ━1 1

　0811 ━2 2

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　0827 ━3 3

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　0921 ━4 4

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　1016 ━5 5

　PDA

　一

　級

　A/B 各2 2 取1 1

　木屑三角瓶

　二級

　A/B 各3 3 取2 2

　木屑原種

　三級

　A/B 各 22 取 20

　菌種瓶

　四級

　A A 或 或 0 B 40 籃

　栽培瓶

　五級

　6 24576 瓶/ / 庫

　二、

　增殖培養(yǎng)：

　1. 將精選 2 組組織培養(yǎng)皿分別移轉(zhuǎn)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中； 2. 放置恒溫培養(yǎng)箱中，溫控 20℃濕度自然； 3. 各代種菌譜表編碼以下所表示：

　三、

　各級培養(yǎng)基制作：

　1. 一級種 PDA 制作方法：1000cc 水（1 千克）、300g 土豆去皮去芽、25g 葡萄糖、25g 瓊脂粉； 制作工序：

�、� 細(xì)胞培養(yǎng)皿空瓶洗凈后，塞入脫脂棉后干熱殺菌 120℃四小時，冷卻備用； ② 土豆切丁1公分大小煮25分鐘，使用1200cc水煮成1000cc；（土豆吸收及水蒸發(fā)量為 200g）

　③ 經(jīng)紗布過濾后取汁，加入葡萄糖 25g、瓊脂 25g，煮沸關(guān)火。

�、� 注入培養(yǎng)皿中 15 ㏄（厚度約為 3 ㎜），立放滅菌 120 度 25分鐘，取出冷卻（3 天后使用）； ⑤ 保留環(huán)境在恒溫培養(yǎng)箱中溫度 20℃，使用期限 15 天； ⑥ 接種（增殖培養(yǎng)或組織培養(yǎng)）后，足三天后采取立放方法培養(yǎng),第五天篩選第一次，第 8 天篩選第二次，將走菌速度過快或過慢淘汰，菌面未形成三圈者淘汰； ⑦ 走菌條件：恒溫 20℃,不得放置低溫保留； 2. 二級種木屑三角瓶制作方法：純木屑、米糠、大豆皮、麩皮、水、三角瓶 6 個； 制作工序：

�、� 300ml 空瓶洗凈后，塞入脫脂棉后干熱殺菌 120℃四小時，冷卻備用；（或使用透氣硅膠栓，可免去空熱殺菌）

�、� 木屑使用網(wǎng)篩過選，去除細(xì)粉及過粗顆粒及雜質(zhì)； ③ 裝填后含瓶重 320g 含水率 63％、，木屑百分比 78％、米糠百分比 15％、大豆皮 2％、麩皮 5％。

　④ 裝填后打孔，在使用清水洗凈四面，塞棉花后包牛皮紙或使用透氣硅膠栓封瓶口； ⑤ 滅菌栽培瓶一同滅菌，完成后放置無塵操作臺冷卻后接種； ⑥ 接種后放置養(yǎng)菌室進(jìn)行馴化培養(yǎng)階段，溫控 19℃。

　3. 三級種玻璃原種瓶制作方法：純木屑、米糠、大豆皮、麩皮、水、玻璃瓶 44 瓶；（A 種為主 B 種備用）

　制作工序：

�、� 500ml 空瓶洗凈后，塞入脫脂棉后干熱殺菌 120℃四小時，冷卻備用；（或使用透氣硅膠栓，可免去空熱殺菌）

�、� 木屑使用網(wǎng)篩過選，去除細(xì)粉及過粗顆粒及雜質(zhì)； ③ 裝填后含瓶重 630g 含水率 63％、木屑百分比 78％、米糠百分比 15％、大豆皮 2％、麩皮 5％； ④ 裝填后打孔，再使用清水洗凈四面，塞棉花后包牛皮紙或使用透氣硅膠栓封瓶口； ⑤ 滅菌栽培瓶一同滅菌，完成后放置菌種冷卻室冷卻后接種； ⑥ 接種后放置菌種養(yǎng)菌室進(jìn)行馴化培養(yǎng)階段，溫控 18℃； 4. 四級種菌種瓶制作方法：純木屑、米糠、大豆皮、麩皮、水、塑料瓶 640 個／40 籃；（每隔 3 天多做 B 種 40 籃以作備用）

　制作工序：（可和三級種配方一同制作使用）

�、� 1100ml 空瓶洗凈后倒放備用； ② 木屑使用網(wǎng)篩過選，去除細(xì)粉及過粗顆粒及雜質(zhì)； ③ 裝填后含瓶重 830g 含水率 63％、木屑百分比 78％、米糠百分比 15％、大豆皮 2％、麩皮 5％； ④ 裝填后打孔加菌種專用蓋，再使用清水洗凈四面； ⑤ 使用橡皮筋將瓶蓋下沿套��； ⑥ 滅菌栽培瓶一同滅菌，完成后放置菌種冷卻室冷卻后接種； ⑦ 接種后放置菌種養(yǎng)菌室進(jìn)行培養(yǎng)階段，瓶間溫度 18℃； ⑧ 培養(yǎng)期間注意事項(xiàng)：接種后第 10 天初選一次，如發(fā)覺異常時查看菌譜，不良率達(dá) 1％時（6 瓶）立即回報(bào)處里； ⑨ 培養(yǎng)第 18 天進(jìn)入雙接階段，查看走菌速度及菌面是否積存水珠，如有異常立即回報(bào)；

　四、

　人職員作責(zé)任分配表：（接菌班、環(huán)控班、菌種班）

　1. 接菌班；（2 人）

�、� 08：00 以前完成接菌全部程序，一人將前一日處里好菌種移入接菌室，另一人同時火焰消毒接菌機(jī)，08：00 接出第一籃栽培瓶，12：00 前接菌室完成清理工作； ② 接菌期間每臺接菌機(jī)使用2籃菌種時，根本清理接菌機(jī)一次，導(dǎo)槽及壓克力板及活動口拆卸后使用 75 度酒精布擦洗，再將挖刀擦拭，組裝完成后使用火焰槍過火消毒； ③ 下午 13：00 或餐后 2 人同時依程序進(jìn)入無塵室進(jìn)行處里菌種工作； ④ 挑選菌種指標(biāo)：每次使用量為 40 籃菌種，假如處里時發(fā)覺異樣或雜菌超出 6 瓶時,立即停止處里,立即會報(bào)主管人員，查出問題發(fā)生根源再提報(bào)廠長進(jìn)行緊急補(bǔ)救方法。

�、� 因菌種以 A 種為關(guān)鍵繁殖種，每日接種數(shù)量為 40 籃，聯(lián)作三天時第四天會加作 B 種 40 籃作為緊急備用； ⑥ 如正常生產(chǎn)無異常時，緊急備用 B 種菌種需移入栽培房做生長之用； ⑦ 處里菌種工作完成，立即清理現(xiàn)場及交付日報(bào)表格后下班； ⑧ 所使用菌種是上個循環(huán)菌種班時自己所接菌種，一個循環(huán)結(jié)束后將輪至環(huán)控班工作； 制作工序：

�、� 菌種養(yǎng)菌室取菌種 40 籃∕批； ② 每瓶開蓋泡入甲酚皂（來蘇爾）50：1 稀釋液中取出，倒蓋籃內(nèi)堆放； ③ 在 FFU 工作臺下由一人挖除上層菌皮，交付給另一人使用 75度酒精布擦拭瓶口（不得碰觸到菌面）再用酒精燈燒菌面，倒放在殺菌過鐵板籃內(nèi)（鐵板使用甲酚皂 50：1 稀釋液潑灑，造成水封瓶口）堆放至隔天使用； ④ 將早晨接完鐵板籃及下午剩下空籃蓋移出至做菌場指定位置存放；

　2. 環(huán)控班；（2 人）

�、� 早上 07：30 沐浴、08：00 以前依程序進(jìn)入無塵室進(jìn)行工作； ② 將已洗好無塵服取出至晾衣區(qū)掛起； ③ 量測預(yù)冷室中待接菌瓶中溫度是否達(dá)成 18℃，如達(dá)成標(biāo)準(zhǔn)立即通知接菌班人員進(jìn)行常規(guī)工作； ④ 量測菌種預(yù)冷室中待接菌瓶中溫度是否達(dá)成 18℃，如達(dá)成標(biāo)準(zhǔn)立即通知菌種班人員進(jìn)行常規(guī)工作； ⑤ 量測菌母養(yǎng)菌室、原種養(yǎng)菌室、試驗(yàn)室、菌母處里室溫度是否正常，填表交付主管人員； ⑥ 統(tǒng)計(jì)每個壓差計(jì)值，填表交付主管人員； ⑦ 使用風(fēng)速計(jì)量測每一個FFU進(jìn)風(fēng)口風(fēng)量，填表交付主管人員； ⑧ 使用圓形培養(yǎng)皿進(jìn)行一樓各車間空間落塵測試 30 秒，每間對角各測一點(diǎn)，編號后交付主管進(jìn)行培養(yǎng)； ⑨ 使用二氧化氯、必潔仕、75 度酒精布三種藥劑輪番使用，每個輪組交接前必需擦拭無塵區(qū)每個房間墻、天、地板一次； ⑩ 擦拭時不得和一樓工作相沖突，接菌期間不得在正上方區(qū)域走動或清潔，菌種處里時不得在正上方區(qū)域走動或清潔； ? 每日工作除必需量測、統(tǒng)計(jì)、無塵服晾干收納等工作項(xiàng)目外，在輪班前自行調(diào)整清潔區(qū)域和下班時間； ? 一個循環(huán)結(jié)束后將輪至菌種班工作； 3. 菌種班；（2 人）

�、� 早上 07：30 沐浴、08：00 以前依程序進(jìn)入無塵室進(jìn)行工作； ② 依據(jù)二級、三級、四級次序進(jìn)行接種工作； ③ 二級、三級、四級接種時在無塵操作臺進(jìn)行； ④ 將各級種分類依序放置定位，并編號統(tǒng)計(jì)于菌譜表； ⑤ 負(fù)責(zé)各級種自己所接種初檢及復(fù)檢工作，并交付表格隨時反應(yīng)很態(tài)現(xiàn)象；

�、� 接種完成自行清理工作區(qū)域，每日工作完成后下班； ⑦ 一個循環(huán)結(jié)束后將輪至接菌班工作； 4. 搬菌班；（2 人）

　① 08：00 以前依程序進(jìn)入無塵室進(jìn)行工作； ② 將前一天換洗無塵服移入洗衣機(jī)清洗； ③ 取樣量測四個角落臺車瓶內(nèi)溫度是否達(dá)標(biāo)溫度 18℃； ④ 如溫度達(dá)標(biāo)時關(guān)閉下層冷風(fēng)機(jī)； ⑤ 接種工作完成后一次性移出臺車，經(jīng)第四爐轉(zhuǎn)出； ⑥ 清理預(yù)冷室及緩沖區(qū)，開紫外線燈并消毒后下班； ⑦ 下午出爐時以進(jìn)爐次序依序推出，擺放方法依據(jù)依據(jù)做菌時第一臺車至最終一臺車依要求位置擺放，接菌時迭放傳送帶次序也依據(jù)擺放次序依序接菌； ⑧ 出爐注意事項(xiàng)：

　第一爐結(jié)束后達(dá)開門條件時，首先全開內(nèi)門,再開啟外門 30 公分，當(dāng)?shù)诙�爐結(jié)束后達(dá)開門條件時，首先全開內(nèi)門,再開啟外門 30 公分，此時推出第一爐臺車至預(yù)冷室依要求位置擺放，出完?duì)t后關(guān)閉內(nèi)門； 當(dāng)?shù)谌隣t結(jié)束后達(dá)開門條件時，首先全開內(nèi)門,再開啟外門 30 公分，此時推出第二爐臺車至預(yù)冷室依要求位置擺放，出完?duì)t后關(guān)閉內(nèi)門； 當(dāng)?shù)谒臓t結(jié)束后達(dá)開門條件時，首先全開內(nèi)門,再開啟外門 30 公分，此時推出第三爐臺車至預(yù)冷室依要求位置擺放，出完?duì)t后關(guān)閉內(nèi)門； 當(dāng)?shù)谒臓t爐內(nèi)溫度稍降時，推出第四爐臺車至預(yù)冷室依要求位置擺放，出完?duì)t后關(guān)閉內(nèi)門； ⑨ 出爐完成后使用地拖沾二氧化氯稀釋液，將預(yù)冷室及緩沖室地板脫濕，使用甲酚皂 50：1 稀釋液消毒； ⑩ 菌種預(yù)冷程序和栽培瓶出爐及消毒程序相同；

　? 搬運(yùn)、清潔、消毒等工作完成時開啟預(yù)冷室、緩沖室、菌種預(yù)冷室紫外線燈，以后下班離開； ? 打開爐門前必需注意緩沖室壓差計(jì)是否正壓值達(dá)標(biāo)； 5. 預(yù)備班；（2 人）

�、� 負(fù)責(zé)二級種、三級種裝瓶工作、四級種加工工作； ② 天氣炎熱時（做菌場內(nèi)溫度達(dá) 25℃以上）二級種、三級種、四級種裝填完成后立即搬入 20 度以下庫房中保留，等候第一爐門關(guān)閉前放入滅菌； ③ 在要求存放位置取菌種專用鐵板籃進(jìn)行清洗，放置滅菌爐殺菌備用； ④ 由栽培空瓶中挑選透明度高、無破損、瓶口完整空瓶提前清洗菌種瓶倒蓋以作隔日使用； ⑤ 挑選菌種專用瓶蓋，無變形、無損壞、內(nèi)置透氣無紡布潔凈無菌絲或雜物； ⑥ 依據(jù)無塵室主管提出數(shù)量：制作 PDA 細(xì)胞培養(yǎng)皿及圓形培養(yǎng)皿，供無塵室使用； ⑦ 二級種瓶、三級種瓶塞棉花并干熱殺菌備用 五、

　無塵室工作人員調(diào)休措施：（接菌班、環(huán)控班、菌種班）

�、� 無塵室內(nèi)部工作屬責(zé)任制，在接菌班及菌種班操作人員不可避免請假要求時，無塵室主管由環(huán)控組調(diào)動，在調(diào)動期間接菌班及菌種班應(yīng)在要求時間內(nèi)工作完成后，齊力完成環(huán)控班當(dāng)日計(jì)劃工作； ② 調(diào)休時無塵室主管必需統(tǒng)計(jì)每人工作調(diào)度情況，用以追蹤菌譜可能發(fā)生變量； ③ 當(dāng)無法調(diào)度時再由預(yù)備班以不影響關(guān)鍵制瓶工作前提下，進(jìn)行調(diào)度； ④ 預(yù)備班如有休假時，由無塵室主管遞補(bǔ)工作； ⑤ 搬菌班如有休假時，由無塵室主管向廠長提報(bào)申請外援； ⑥ 無塵室人員在本職員作完成后必需支持其它部門調(diào)度工作；

　六、

　無塵室工作人員獎懲措施：

�、� 無塵室內(nèi)部工作屬責(zé)任制，接菌班、環(huán)控班、菌種班、搬菌班，以追蹤經(jīng)手一個周期 3～5 級菌良率為計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)； ② 栽培瓶五級菌良率達(dá) 99％時，該班各得崗位獎金 500 元； ③ 栽培瓶五級菌良率達(dá) 98％時，該班各得崗位獎金 300 元； ④ 栽培瓶五級菌良率達(dá) 97％時，該班各得崗位獎金 200 元； ⑤ 栽培瓶五級菌良率達(dá) 96％時，該班取消崗位獎金； ⑥ 栽培瓶五級菌良率達(dá) 95％時，該班扣除崗位獎金 200 元； ⑦ 栽培瓶五級菌良率達(dá) 94％時，該班扣除崗位獎金 300 元； ⑧ 栽培瓶五級菌良率達(dá) 93％時，該班扣除崗位獎金 500 元； ⑨ 栽培瓶五級菌良率達(dá) 92％時，該班調(diào)離無菌室部門； ⑩ 私自省略工序、造假填表或更改工作規(guī)范者，該班調(diào)離無菌室部門其它各班取消全部津貼； ? 無塵車間主管（組長）在合理標(biāo)準(zhǔn)下含有對各班班員任命及調(diào)職權(quán)力； ? 無塵車間主管（組長）獎、懲和各班每七天期相同金額處里； ? 為了監(jiān)控及保護(hù)菌成功率，無塵車間主管有權(quán)監(jiān)督養(yǎng)菌車間前置區(qū)環(huán)境維護(hù)，必需時可和養(yǎng)菌車間主管研究改善，經(jīng)廠長認(rèn)可實(shí)施； 七、

　薪資說明：

�、� 維持基礎(chǔ)薪資； ② 支持其它部門工作時加班費(fèi)； ③ 當(dāng)經(jīng)過技能評測達(dá)標(biāo)時，熟悉操作接菌機(jī)時加發(fā) 100 元； ④ 當(dāng)經(jīng)過技能評測達(dá)標(biāo)時，熟悉菌種優(yōu)劣判定時加發(fā) 100 元； ⑤ 依據(jù)崗位獎金獎懲發(fā)放標(biāo)準(zhǔn)； ⑥ 良率不達(dá)各級標(biāo)按時，扣除崗位獎金方法，企業(yè)只保留基礎(chǔ)薪資外由其它工資收入中扣除（含部門外加班費(fèi)）；

　八、 補(bǔ)充說明：

�、� 連續(xù) 2 個周期總評量結(jié)果良率達(dá) 98％時，企業(yè)將實(shí)施第二階段調(diào)整良率并提升崗位獎金做為獎勵； ② 崗位獎金認(rèn)定方法，由廠長依據(jù)專業(yè)判定決定問題根源，如發(fā)生在操作人員瀆職所造成不良率提升，無任何理由接收罰款處份； ③ 工序更改或省略不管良率高或低，企業(yè)將以瀆職理由論處，立即調(diào)離無菌室部門，并扣除全部基礎(chǔ)薪資以外其它工資收入； ④ 無塵車間主管（組長）獎、懲和各班每七天期相同金額處里，如督導(dǎo)不周造成企業(yè)重大損失時，企業(yè)將以瀆職理由論處，立即調(diào)離無菌室部門，并扣除全部基礎(chǔ)薪資以外其它工資收入； ⑤ 一級種和無菌室環(huán)境設(shè)定由廠長負(fù)責(zé)或授權(quán)她人代理，其它工作由組長負(fù)責(zé)監(jiān)督及實(shí)施； ⑥ 以下空格由手寫制訂：

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